generalitate
Imunofixarea este un test de laborator care permite identificarea și tastarea globalizărilor gamma prezente într-o probă biologică.
În detaliu, analiza permite studierea - în sânge sau în urină a pacientului - a claselor de imunoglobuline (IgA, IgG, IgM, IgE sau IgD) și tipul de lanț ușor kappa sau lambda, în funcție de mobilitatea lor electroforetică specifică . Ulterior, pentru identificarea gama globulinei implicate, imunofixarea implică inocularea antigenelor specifice pentru fragmentul sau anticorpul corespunzător ( antiser anti-imunoglobulină ): prezența modificării suspectate este confirmată de formarea a unui precipitat, vizibil cu ochiul liber sau sub microscop.
Această informație are o importanță deosebită pentru a stabili, în special, diagnosticarea bolilor cu celule plasmatice (gamopatii sau discrasii ale celulelor plasmatice). Imunofixarea este foarte utilă pentru evaluarea și monitorizarea mielomului multiplu, a macroglobulinemiei Waldenström și a amiloidozei primare (numită și amiloidoza lanțului ușor).
ce
Imunofixarea (sau imunoelectroforeza, de asemenea abreviată la acronimul IFE ) este o tehnică care poate determina dacă și ce clasă de imunoglobuline (IgG, IgM, IgA, IgD, IgE) sau tipul de lanț ușor kappa sau lambda excesul sau defectul în serul de sânge și în urina pacientului.
Lanțurile ușoare kappa și lambda caracterizează componenta monoclonală, adică anticorpii cu exact aceeași structură chimică.
Imunofixarea serică și urinară: când este indicată?
Discrasiile plasmatice sau gamopatiile sunt un grup heterogen de tulburări, de etiologie necunoscută, caracterizat prin:
- Proliferarea unei clone a celulelor B este disproporționată ;
- Prezența în ser și / sau urină a unui tip de imunoglobulină (sau a subunității sale de polipeptidă), omogenă structural și electroforetic ( monoclonal ).
În mod normal, discrasiile cu celule plasmatice sunt diagnosticate utilizând electroforeza proteinică a serului și a urinei, urmată de imunofixarea serică (IFE).
În același timp, poate fi prescris un test de sânge pentru măsurarea concentrației totale de imunoglobulină (IgG + IgM + IgA).
Pentru a afla mai multe: Imunoglobulinele - ce sunt, modul în care acestea măsoară și valorile de referință »Imunofixarea: principiu de bază
Imunofixarea este o examinare în două faze (mai întâi electroforeza pe gel de agaroză, apoi imunoprecipitarea cu antiseruri specifice ).
Prima etapă a imunofixării este aceeași cu cea a ELECTROFOREZEI de proteine (sau protidogramma), prin urmare este necesar să ne amintim un concept:
- Electroforeza este o analiză de laborator care permite determinarea cantității de proteine prezente în serul de sânge sau alte probe biologice și, pentru fiecare fracție, arată dacă există anomalii în ceea ce privește calitatea. În special, acest test permite separarea proteinelor în cinci grupe: albumină, globulele alfa 1, globulele alfa 2, beta globuline și gama globuline ; acestea din urmă sunt mai specific investigate cu imunofixare.
- Electroforeza este o metodă de separare bazată pe viteza de migrare diferită a particulelor încărcate electric, printr-o soluție și un mediu de susținere inert, sub influența unui câmp electric, generat de un curent direct. În practică, testul exploatează sarcina electrică și masa moleculară a proteinelor prezente în eșantionul pacientului. Sub impulsul unui câmp electric, aceste macromolecule migrează și "grupează" după tip, răspunzând la stres într-un mod caracteristic. Rezultatul ( modelul electroforetic ) constă din vârfuri și curbe diferite, la care corespund fracțiile de proteine. În mod normal, primul vârf, mai înalt și mai îngust, este cel al albuminei ; pentru a urmări, se observă vârfurile globulinelor, mult mai scăzute decât albumina. Creșterea sau scăderea amplitudinii și intensității vârfurilor formate în urma indică o prezență mai mare sau mai mică a proteinelor din fiecare categorie; cu cât mai multe proteine sunt prezente într-o bandă, cu atât este mai mare vârful respectiv. În cazul gamaglobulinelor, dacă doriți să cunoașteți cantitatea fiecăreia dintre clasele diferite (IgA, IgM, IgG etc.), va trebui să recurgeți la doza unică. În general, cu cât mai multe gama globuline sunt prezente într-o bandă, cu atât vârful respectiv este mai mare; înălțimea corespunde cantității totale de proteine care aparțin unei anumite categorii.
IMUNOFISSAZIONE prevede:
1) Electroforeza gelului de agaroză : eșantionul pacientului (ser sau urină) este depus pe o bandă electroforetică, adică suportul de migrare (de obicei, gel de agaroză). Prin aplicarea unui câmp electric, generat de un curent direct, se obține separarea în diferite benzi. În practică, fiecare tip de gama globulină prezentă în amestec (care este în proba pacientului) migrează în funcție de masa moleculară și sarcina electrică. Diferitele mobilități electroforetice ale gamaglobulinelor fac posibilă identificarea acestora (fiecare dintre acestea coincide cu o bandă specifică pe calea electroforetică) și pentru a observa orice anomalie.
2) Imunoprecipitarea cu antiseruri specifice (fixare) : antigene specifice pentru un anticorp dat sau un fragment (anti-IgG, anti-IgA, anti-IgM, kappa anti-lumină sau anticorp ) sunt adăugate individual la fiecare bandă electroforetică. lambda lanț ușor). Dacă este prezentă o proteină monoclonală, interacțiunea antigenului cu anticorpul corespunzător va produce o bandă îngustă (ceea ce înseamnă că rezultatul este pozitiv) și formarea unui precipitat, vizibil cu ochiul liber sau sub microscop. În cele din urmă, proba este prelucrată (adică spălată și colorată) pentru a îndepărta proteinele care nu au precipitat, pentru a obține uscarea gelului și pentru a continua citirea rezultatelor.
De ce da
Pentru ce este imunofixarea?
Imunofixarea serică este un test indicat pentru diagnosticarea sau monitorizarea bolilor caracterizate de o modificare a gamaglobulinei, în special atunci când se referă la producerea componentei monoclonale ( gamapatie monoclonală ).
Pentru a afla mai multe: Gammopatiile monoclonale - Ce si ce sunt »Imunofixarea este utilă în cazurile de discrasie plasmăcelulară suspectată și este esențială pentru studiul MIELOMA (și a bolilor asociate) și MGUS (acronimul "gammaticii monoclonale cu semnificație incertă").
Această examinare permite, de asemenea, evaluarea macroglobulinemiei Waldenström și a amiloidozelor cu lanț ușor ( AL ).
Imunofixarea: când este prescris examenul?
Indicația privind imunofixarea este ulterioară constatărilor clinice sau de laborator care ridică suspiciunea de modificări ale anticorpilor sau imunoglobulinelor monoclonale în ser sau în urină.
De exemplu, acest test permite aprofundarea rezultatului electroforezei seropro- sau urinare: atunci când în calea electroforetică, benzile care corespund gamaglobulinelor se abat de la normalitate, imunofixarea identifică care dintre aceste proteine este modificată, în termeni de cantitate și calitatea.
În rezumat, imunofixarea serică poate fi prescrisă:
- În cazul în care alte teste de laborator furnizează un rezultat anormal, în ceea ce privește absența sau cantități mai mici și mai mari de proteine din plasmă decât în mod normal;
- Când suspectăm prezența bolilor caracterizate prin producerea unei componente monoclonale, cum ar fi:
- Mielom multiplu și variantele sale;
- Waldenström macroglobulinemia;
- amiloidoza;
- Când pacientul are simptome și semne care determină prezența unei gamapatii monoclonale sau a unui mielom multiplu, cum ar fi:
- Dureri osoase;
- anemia;
- Oboseală ușoară;
- Infecții recurente;
- Fracturi inexplicabile.
În cazul mielomului multiplu, electroforeza proteinelor și imunofixarea sunt, de asemenea, foarte utile pentru monitorizarea progresului bolii (follow-up).
Imunofixarea: pe care se pot efectua probe?
Probele biologice care pot fi supuse imunofixării sunt în principal:
- Ser (imunofixare serică);
- Urina (imunofixare urinară);
- Lichid * (imunofixare lichidă).
* Notă : lichidul sau lichidul cefalorahidian este lichidul care pătrunde și protejează creierul, măduva spinării, nervii cranieni și rădăcinile spinării.
Valori normale
Un rezultat NEGATIV al imunofixării serice și urinare pentru gama globulinelor monoclonale sau policlonale este considerat NORMAL .
Gama globulină
Gama globulinelor reprezintă 9-20% din proteinele plasmatice totale.
- Valoare de referință Gamma globuline : 0, 9-1, 4 g / dl
În ceea ce privește concentrația totală de imunoglobuline ( IgG + IgM + IgA ), se crede că valorile cuprinse între 600 și 2300 mg / dl sunt normale.
- Valoarea de referință Imunoglobulină în ser :
- IgA : 90-400 mg / dl
- IgG : 800-1800 mg / dl
- IgM : 60-280 mg / dl
- IgD : 0, 3-0, 4 mg / dl
- IgE : 20-440 mg / dl
Notă : intervalul de referință al examinării poate varia ușor în funcție de vârstă, sex și instrumentație utilizat în laboratorul de analiză. Din acest motiv, este preferabil să consultați intervalele raportate direct pe raport. De asemenea, trebuie avut în vedere faptul că rezultatele analizelor trebuie evaluate în ansamblu de medicul general, care cunoaște imaginea anamnestică a pacientului.
Valori mari - cauze
Creșterea gama globulinei poate fi:
- Polyclonal, în cazul în care producția de imunoglobuline este eterogenă, adică toate componentele gama de globulină - produse sau derivate din celule plasmatice diferite - sunt afectate de creștere;
- Monoclonal, când se produc gama globuline sau derivă dintr-un singur tip (clonă) de celule plasmatice.
Creșterea intervalului de globulină policlonală poate fi asociată cu:
- Boli inflamatorii cronice;
- Poliartrita reumatoidă;
- Lupus eritematos sistemic;
- Boli cronice ale ficatului (cum ar fi hepatita și ciroza);
- Infecții acute și cronice;
- Imunizări recente;
- Unele boli ale cancerului.
Valorile gamma globulinelor monoclonale ridicate pot indica, în schimb, prezența:
- Unele neoplasme și inflamații cronice;
- Mielom multiplu;
- limfom;
- Macroglobulinemia lui Waldenström.
Un exces de gama globulină se numește hipergamaglobulinemie, în timp ce o deficiență este cunoscută sub numele de hipogamaglobulinemie .
Valori mici - cauze
Reducerea globulinelor gama poate indica prezența diferitelor boli genetice ale sistemului imunitar, inclusiv agamaglobulinemia, sau a unei imunodeficiențe secundare (de exemplu, SIDA, insuficiență renală, septicemie acută și sindromul Cushing).
Scăderea valorilor gama globulinei poate depinde, de asemenea, de aportul de medicamente citostatice, imunosupresoare și steroizi.
Cum se efectuează
Imunofixarea sirică
Imunofixarea serică implică o trasare simplă a sângelui dintr-o venă a brațului. Serul se obține prin centrifugarea probei biologice; acest lucru permite, de fapt, separarea fracțiunii care conține celulele (partea corpusculară) de partea lichidă a sângelui (plasmă). Serul de sânge nu conține factori de coagulare (fibrinogen, factor VIII, factor V și protrombină).
Imunofixarea urinară
Pentru a efectua imunofixarea urinară, este necesar să colectați o cantitate mică de urină într-un recipient steril special. Conform indicațiilor medicului și laboratorului, proba poate fi colectată fără un timp exact ( aleatoriu ) sau în decurs de 24 de ore .
Imunofixarea lichiorului
Analiza necesită îndepărtarea unei mici cantități de lichid cefalorahidian, prin introducerea unui ac, în cavitatea spinală ( puncție lombară ).
preparare
Imunofixarea: cum să vă pregătiți pentru examen?
- Înainte de prelevarea de probe de sânge, unele laboratoare pot necesita un postaj de cel puțin 10-12 ore. În această perioadă de timp este permis să se ia o cantitate mică de apă.
- Imunofixarea poate fi efectuată pe urină colectată la o anumită oră a zilei (aleatorie) sau în decursul celor 24 de ore, astfel încât este necesar să se obțină în avans containerele sterile adecvate.
- Cu toate acestea, în ceea ce privește imunofixarea lichiorului, nu este necesară nicio preparare specială.
Ce poate modifica rezultatul examenului?
Unele medicamente pot afecta rezultatul imunofixării, prin urmare este recomandabil să se prezinte medicului orice tratament farmacologic în curs de desfășurare.
În cele șase luni anterioare examinării, administrarea vaccinurilor (imunizarea) și utilizarea medicamentelor, cum ar fi fenitoina, procainamida, contraceptivele orale, metadona și gamaglobulinele terapeutice, pot crește concentrația de imunoglobuline. Alte medicamente care pot modifica rezultatul testului sunt corticosteroizi, neomicină, acid acetilsalicilic și clorpromazină.
Interpretarea rezultatelor
Rezultatul imunofixării este evaluat în combinație cu rezultatul altor analize. Interpretarea descoperirii este adresată medicului general sau specialistului de referință care poate identifica și raporta modificările la o anumită gama globulină (de exemplu, banda care coincide cu imunoglobulinele G) la anumite boli. Această evaluare confirmă sau susține ipoteza de diagnosticare: în general, imunofixarea poate dezvălui un profil normal de gamma globulină sau poate identifica o proteină monoclonală sau un model policlonal .
Odată ce boala a fost definită, imunofixarea poate fi efectuată la:
- Monitorizați boala în timp, apoi urmați cursul (urmărirea);
- Verificați eficacitatea protocolului terapeutic .
Pro și Contra de Imunofixare
Comparativ cu electroforeza proteinică, imunofixarea:
- Este mai rapid : rezultatele imunofixării sunt obținute în mod obișnuit în decurs de trei ore;
- Este mai sensibil (deși puțin): imunofixarea poate dezvălui o imunoglobulină exclusă din electroforeza proteică, în special la concentrații scăzute (mai puțin de 1 gram / litru).
Mai mult, imunofixarea:
- Poate fi parțial automatizat ;
- Este ușor de citit și interpretabil .
Cu toate acestea, imunofixarea este mai scumpă decât electroforeza proteică și permite doar analiza gama globulinei .
Rezultat normal
În imunofixație, o cale normală include:
- O bandă care coincide cu imunoglobulina mai închisă G ( IgG );
- O bandă corespunzătoare imunoglobulinei mai ușoare A ( IgA );
- Absența benzii pentru imunoglobulina M ( IgM );
- Banda kappa este mai densă decât cea a lambda (lanțul ușor), cu un raport de 2: 1.
Într-un rezultat normal, benzile sunt mari și există o reducere graduală și uniformă a densității culorii către marginile benzii de imunoelectroforeză.
Glomaglobuline policlonale
În unele cazuri, toate benzile imunofixării sunt omogene acoperite în aceeași măsură. Acest model reprezintă prezența imunoglobulinelor policlonale . De asemenea, în acest caz benzile sunt mari, iar trecerea la marginile benzii imunoelectroforetice este graduală. Banda IgM - în mod normal absentă - este largă.
Gama globulinelor monoclonale
Atunci când o bandă îngustă cu marginile ascuțite poate fi identificată în calea imunofixării, înseamnă că căutarea componentelor monoclonale este pozitivă .
Identificarea unei imunoglobuline monoclonale este utilă în diagnosticarea următoarelor condiții:
- Gamopatia monoclonală cu semnificație nedeterminată (MGUS);
- Mielom multiplu;
- Waldenstrom macroglobulinemia;
- Amiloidoza.
Mai mult, imunofixarea poate fi utilizată pentru monitorizarea terapiei în discrasiile cu celule plasmatice (de exemplu, mielomul multiplu și macroglobulinemia Waldenstrom). Dacă nivelul proteinei monoclonale scade sau nu este detectabil după chimioterapie, poate indica un răspuns la tratament . În schimb, o proteină monoclonală persistentă în ciuda tratamentului este un semn al bolii refractare .
Notă . Un rezultat negativ la imunofixare nu exclude întotdeauna o discrasie plasmacelluică. De exemplu, un mielom multiplu non-secretor sau oligosecretor poate da rezultate negative atât în urină, cât și în ser. Prin urmare, dacă suspiciunea de diagnosticare a gamapatiei este încă ridicată, este indicată determinarea raportului dintre lanțurile Kappa / Lambda Libere ( raportul K / L ).
Imunofixarea și diagnosticul de scleroză multiplă
Imunofixarea lichidului cefalorahidian (CSF) este prescrisă atunci când medicul suspectează prezența sclerozei multiple . În acest caz, trasatura care este determinată este caracteristică, deoarece subliniază prezența așa-numitelor benzi oligoclonale . Rezultatul este raportat în poziția de laborator ca pozitiv . Trebuie să se considere că benzile nu sunt observate în mod normal în imunofixarea serică, deoarece acestea se corelează cu producerea de gamaglobuline intrathecale .
Cu toate acestea, trebuie remarcat faptul că această constatare nu confirmă neapărat diagnosticul, deoarece alte condiții pot apărea în benzile oligoclonale din lichidul cefalorahidian.
Cu alte cuvinte, identificarea benzilor oligoclonale cu imunofixarea lichidului este foarte utilă pentru susținerea diagnosticului de scleroză multiplă, dar trebuie să fie confirmată de alte investigații . Alte condiții care pot oferi astfel de rezultate sunt inflamația sistemului nervos central, incluzând: encefalita legată de HIV, neurosifilis, neurosarcoidoză, meningoencefalita Lyme, tumori maligne ale SNC, neuromielită optică și mielită transversală.
